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蛋白质纯度的测定方法有哪些?

更新时间:2024-04-28 06:40:33
问题描述:

蛋白质纯度的测定方法有哪些?

马维一回答:

  超速离心:既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量.

  含量测定方法很多:

  凯氏定氮:灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为±2%,干扰少,费时8小时

  双缩脲法(Biuret法):灵敏度低1~20mg,中速20~30分钟

  紫外吸收法:较为灵敏50~100mg,快速5~10分钟

  Folin-酚试剂法(Lowry法):灵敏度高5mg,40~60分钟,操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化

  考马斯亮蓝法(Bradford法):灵敏度最高1~5mg,15分钟,常用

  分子量测定:

  SDS-PAGE:还原SDS测定结果比较接IC-MS,价格适中,常用

  高效凝胶过滤色谱:标准蛋白质和待测蛋白质形状一致时,准确高,差别越大越不准确

  电喷雾离子化质谱:最准确

  等电点测定:在不同pH条件下测量蛋白质的电泳迁移率,然后用迁移率对pH作图,对应于迁移率为零的pH就是蛋白质的等电点.